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新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达

梁文星 范在丰 李永 宋丽敏 李怀方 田国忠

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新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达

  • 基金项目:

    国家重点基础研究发展规划项目“树木育种的分子基础研究”(973项目)(G1999016003)

The Cloning and Functional Expression of a Kunitz Trypsin Inhibitor Gene from Populus alba var.pyramidalis

  • 摘要: 杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘CCAAT’等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽。此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽。将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5μg融合蛋白可完全抑制1μg牛胰蛋白酶的活性。W estern b lot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应。
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出版历程
  • 收稿日期:  2005-06-07

新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达

  • 1. 中国农业大学植物病理系, 北京 100094
  • 2. 中国林业科学研究院森林生态环境和保护研究所, 国家林业局森林保护学重点实验室, 北京 100091
基金项目:  国家重点基础研究发展规划项目“树木育种的分子基础研究”(973项目)(G1999016003)

摘要: 杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘CCAAT’等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽。此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽。将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5μg融合蛋白可完全抑制1μg牛胰蛋白酶的活性。W estern b lot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应。

English Abstract

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