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泡桐丛枝植原体胸苷酸激酶的原核表达、纯化及酶活性测定

宋传生 胡佳续 林彩丽 任争光 耿显胜 田国忠

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泡桐丛枝植原体胸苷酸激酶的原核表达、纯化及酶活性测定

  • 基金项目:

    国家自然科学基金(30872025和31170602)

  • 中图分类号: S792.43

Prokaryotic Expression, Purification and Enzyme Activity Assay of Thymidylate Kinase of the Paulownia Witches'-broom Phytoplasma

  • CLC number: S792.43

  • 摘要: 胸苷酸激酶是dTTP从头合成和补救途径的关键酶,催化dTMP形成dTDP,在DNA复制和生物的生存中发挥着必不可少的作用. 本文在前期研究的基础上,对从泡桐丛枝(PaWB)植原体中获得的的3个同源蛋白TMK-a-1、TMK-a-2及TMK-b与已报道的小麦蓝矮(WBD)、洋葱黄化(OY-W)植原体的TMK-a、TMK-b的氨基酸序列进行了比对和相似性分析,结果显示PaWBPS TMK-b与WBD TMK-2和OY-W TMK-b之间的相似性分别为95.65%和99.03%;PaWBPS TMK-a-1与PaWBPS TMK-a-2的相似性为90.57%,且二者与WBD TMK-1和OY-W TMK-a之间的相似性为87.32%-94.26%;而PaWBPS、WBD、OY-W三种植原体的TMK-a与TMK-b之间的相似性仅为22.22%-25.95%. 构建了PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2的pET28a原核表达载体,对PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2 3种蛋白进行了原核表达,经Ni-NTA柱纯化后,利用双酶法进行了胸苷酸激酶催化活性测定,结果表明,PaWBPS TMK-b具有较高的胸苷酸激酶活性,为85.96±0.74 U·mg-1,而PaWBPS TMK-a-1和TMK-a-2几乎没有胸苷酸激酶活性. 本文为进一步研究胸苷酸激酶在植原体繁殖过程中的作用机理奠定了基础.
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出版历程
  • 收稿日期:  2014-03-11

泡桐丛枝植原体胸苷酸激酶的原核表达、纯化及酶活性测定

  • 1. 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所, 国家林业局森林保护学重点实验室, 北京 100091
  • 2. 天津出入境检验检疫局, 天津 300457
  • 3. 中国林业科学研究院亚热带林业研究所, 浙江 富阳 311400
基金项目:  国家自然科学基金(30872025和31170602)

摘要: 胸苷酸激酶是dTTP从头合成和补救途径的关键酶,催化dTMP形成dTDP,在DNA复制和生物的生存中发挥着必不可少的作用. 本文在前期研究的基础上,对从泡桐丛枝(PaWB)植原体中获得的的3个同源蛋白TMK-a-1、TMK-a-2及TMK-b与已报道的小麦蓝矮(WBD)、洋葱黄化(OY-W)植原体的TMK-a、TMK-b的氨基酸序列进行了比对和相似性分析,结果显示PaWBPS TMK-b与WBD TMK-2和OY-W TMK-b之间的相似性分别为95.65%和99.03%;PaWBPS TMK-a-1与PaWBPS TMK-a-2的相似性为90.57%,且二者与WBD TMK-1和OY-W TMK-a之间的相似性为87.32%-94.26%;而PaWBPS、WBD、OY-W三种植原体的TMK-a与TMK-b之间的相似性仅为22.22%-25.95%. 构建了PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2的pET28a原核表达载体,对PaWBPS TMK-b、TMK-a-1、TMK-a-2 3种蛋白进行了原核表达,经Ni-NTA柱纯化后,利用双酶法进行了胸苷酸激酶催化活性测定,结果表明,PaWBPS TMK-b具有较高的胸苷酸激酶活性,为85.96±0.74 U·mg-1,而PaWBPS TMK-a-1和TMK-a-2几乎没有胸苷酸激酶活性. 本文为进一步研究胸苷酸激酶在植原体繁殖过程中的作用机理奠定了基础.

English Abstract

参考文献 (30)

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