枫香DNA提取方法与PCR扩增程序的优化

孟现东; 陈益泰

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枫香DNA提取方法与PCR扩增程序的优化

孟现东 , 陈益泰

文章导航 > 林业科学研究 > 2004 > 17(1): 42-46

引用本文:

Citation:

枫香DNA提取方法与PCR扩增程序的优化

孟现东¹,
陈益泰¹

1.
中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳 311400
基金项目:
浙江省"十五"科技重点项目"重要阔叶树种资源培育技术研究"(011102198)部分内容
中图分类号: S792.14

The Method for Liquidambar formosana DNA Extracting and the Optimization of PCR Procedure

MENG Xian-dong¹,
CHEN Yi-tai¹

1.
Research Institute of Subtropical Forestry, CAF, Fuyang311400, Zhejang, China
CLC number: S792.14

摘要: 从SDS、CTAB、高盐低pH值3种方法中选择了CTAB法作为枫香适合的DNA提取方法,同时构建了枫香DNA的PCR扩增程序,并从Mg++浓度、Taq酶用量、dNTP浓度、引物浓度、DNA模板用量等方面优化了PCR扩增程序。
- 枫香
- / DNA提取
- / PCR扩增程序
Abstract: Three methods(SDS method, CTAB method and high salt low pH method)for DNA extracting were compared. The CTAB method was the best method for Liquidambar formosana DNA extracting. And PCR procedure was optimized about the factors Mg++, DNA density etc. It's proved that the optimum PCR procedure was as follows:pre-denaturating under 94 ℃ for 4 minutes, denaturating under 94 ℃ for 1 minutes, annealing under 36 ℃ for 1 minutes and extending under 72 ℃ for 1.5 minutes. After 40 cycles, the sample was reacted for 8 minutes under 72 ℃. PCR system includes buffer 2 μL,Mg++ 3.0 mmol·L-1, Taq enzyme 1 U, dNTP 2.5 mmol·L-1, primer 0.7 mmol·L-1,DNA 60 ng.
- Liquidambar formosana
- / DNA extracting
- / PCR procedure

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