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中间锦鸡儿fad2基因片段克隆、反义表达载体构建及遗传转化初步研究

汪阳东 ,  李春秀 ,  齐力旺 ,  张守攻

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shu
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shu

中间锦鸡儿fad2基因片段克隆、反义表达载体构建及遗传转化初步研究

  • 1.

    中国林业科学研究院林业研究所, 国家林业局林木培育重点实验室, 北京　100091

  • 2.

    中国林业科学研究院亚热带林业研究所, 浙江富阳　311400

  • 基金项目:

    国家高技术研究发展项目(“863”)“抗逆优质柠条新品种选育”(2002)资助

Clon ing of fad2 Gene Fragments from Ca ragana in te rm edia, Constructing ofAn isence fad2 Expression Vector and Its Genetic Transforma tion in Tobacco

  • 1.

    Research Institute of Forestry, CAF

  • 2.

    Key Laboratory of Tree Breeding and Cultivation, state Forestry Administration, Beijing　100091, China

  • 摘要: 以我国重要的生物能源灌木———中间锦鸡儿枝叶和种子为材料,根据GenBank中已经发表fad2基因的同源序列,利用PCR技术克隆得到基因片段。在GenBank中Blast (GenBank登录号AY957393)所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gmfad2-2a同源性高达88% ,位于fad2基因编码区中部。将所得片段经BamH I和Sac I酶切后插入表达载体质粒pB I121,构建了反义表达载体pB I121fad2,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片,获得了抗卡那霉素和氨苄青霉素的再生烟草植株。初步分析结果表明:与对照烟草相比,转基因烟草种子脂肪酸含量没有明显差异,而亚油酸则减少10. 3%。
    Abstract: △-12 fatty acid desaturase is an important enzyme in the route of p roduction of polyunsaturated lip ids. Control the gene exp ression of △-12 fatty acid desaturase can change p lant fatty acid for good p lant biodiesel. Two cDNAfragments of fad2 gene were cloned using degenerate primers from Caragana interm edia, an important biodiesel plant.The DNA sequence analysis indicated that the fragments contained 452 and 480 bp respectively, and shared 88% ofhomology with Glycine max Gmfad2-2a in GenBank. Both of the gene fragments were registered in GenBank(AY957393). The fragment AY957394 (452 bp)was digested with the enzyme BamH I and Sac I, and ligated to thecorresponding sites of the pB I121 in the antisense orientation. The pB I121fad2 vectorwas introduced into Agrobacterium tum efaciens strain LB4404 by electroporation and transformed to leaves of tobacco via Agrobacterium tum efacienssystem. Plantletswere regenerated in vitro by resistance selection on medium containing Amp icillin and Kanamycin.PCR amp lification with p rimer designed according to the fad2 gene fragment and NPTII gene in pB I121 demonstratedthat antisense fad2 was integrated into tobacco genomes. The analysis of fatty acids of transgenic tobacco p lants withantisense fad2 showed that the content of linoleic acid was 10. 3% less than that of the un2transgenic tobacco plants.
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出版历程
  • 收稿日期:  2006-10-30

中间锦鸡儿fad2基因片段克隆、反义表达载体构建及遗传转化初步研究

  • 1. 中国林业科学研究院林业研究所, 国家林业局林木培育重点实验室, 北京　100091
  • 2.  中国林业科学研究院亚热带林业研究所, 浙江富阳　311400
  • 收稿日期: 2006-10-30
基金项目:  国家高技术研究发展项目(“863”)“抗逆优质柠条新品种选育”(2002)资助

摘要: 以我国重要的生物能源灌木———中间锦鸡儿枝叶和种子为材料,根据GenBank中已经发表fad2基因的同源序列,利用PCR技术克隆得到基因片段。在GenBank中Blast (GenBank登录号AY957393)所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gmfad2-2a同源性高达88% ,位于fad2基因编码区中部。将所得片段经BamH I和Sac I酶切后插入表达载体质粒pB I121,构建了反义表达载体pB I121fad2,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片,获得了抗卡那霉素和氨苄青霉素的再生烟草植株。初步分析结果表明:与对照烟草相比,转基因烟草种子脂肪酸含量没有明显差异,而亚油酸则减少10. 3%。

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