一种适合油桐种仁蛋白质分离的双向电泳技术体系

占志勇; 陈益存; 韩小娇; 崔琴琴; 汪阳东

一种适合油桐种仁蛋白质分离的双向电泳技术体系

1.
中国林业科学研究院亚热带林业研究所, 浙江富阳 311400
基金项目:
国家林业局"948"引进项目"木本油料植物油脂合成基因高通量分析技术引进"(2009-4-23)
中图分类号: S794.3

An Improved System of Two-dimensional Electrophoresis for the Tung Tree Seed Protein Separation

1.
Research Institute of Subtropical Forestry, Chinese Academy of Forestry, Fuyang 311400, Zhejiang, China
CLC number: S794.3

摘要: 为奠定油桐蛋白质组学研究的基础,针对影响油桐种仁蛋白质分离效果的几个重要因素进行单因素优化实验,建立了油桐种仁蛋白质组分离效果良好的双向电泳技术平台。实验结果显示:采用TCA-丙酮结合酚抽法提取的油桐种仁蛋白质,经裂解液(7 mol·L-1尿素,2 mol·L-1 硫脲,4% CHAPS, 65 mmol·L-1 DTT,2% IPG buffer)裂解之后,上样700 μg聚焦70 000 Vh,经过SDS-PAGE电泳(分离胶浓度15%,恒功率5 W,电泳时间8 h)后有良好的分离效果,能满足开展后续蛋白质组学研究的实验要求。
- 油桐
- / 双向电泳
- / 蛋白质组学
Abstract: In order to construct a basis for the tung trees protein research, some key factors which could impact on the results of the protein separation were studied and an improved system of two-dimensional electrophoresis were built successfully including the suitable protein extraction method (TCA-acetone combined with phenol), the solution buffer (7 mol·L-1 urea, 2 mol·L-1 thiourea, 4% CHAPS, 65 mmol·L-1 DTT and 2% IPG buffer), the volumes of loading protein (700 μg) in IEF and the better conditions for the SDS-PAGE (15% separation gels and constant 5W for 8 h).
- tung trees
- / two-dimensional electrophoresis (2-DE)
- / proteomics

[1]	蔡金标,丁建祖,陈必勇. 中国油桐品种、类型的分类[J]. 经济林研究,1997, 15(4): 47-50
[2]	凌麓山,何方,方嘉兴,等. 中国油桐品种分类的研究[J]. 经济林研究,1991, 9(2): 1-8
[3]	刘翠峰,王彦英,翟运吾,等. 油桐豫桐1号等3个优良家系的选育[J]. 经济林研究,1996, 14(1): 45-47
[4]	吕平会,李龙山,谢复明,等. 油桐优良单株选择[J]. 经济林研究,1993, 11(2): 88-91
[5]	龚榜初,蔡金标. 油桐育种研究的进展[J]. 经济林研究,1996, 14(1): 51-53
[6]	刘益兴,贺赐平,李正茂,等. 不同繁殖方式对油桐树体结构及产量的影响[J]. 中南林业科技大学学报,2010, 30(5): 61-66
[7]	隆振雄. 油桐北移引种幼苗越冬相关性状的遗传分析[J]. 西北林学院学报,1996, 11(3): 31-35
[8]	涂炳坤,郭刚奇,徐正红,等. 油桐数量性状的主成分分析及分类[J]. 华中农业大学学报,1994, 13(3): 296-300
[9]	夏逍鸿,卢龙高. 油桐主要经济性状与产油相关分析[J]. 浙江林业科技,1992, 12(1): 32-33
[10]	吴开云,费学谦,姚小华. 油桐DNA快速提取以及RAPD扩增的初步研究[J]. 经济林研究,1998, 16(3): 28-30
[11]	汪阳东,李元,李鹏. 油桐桐酸合成酶基因克隆和植物表达载体构建[J]. 浙江林业科技,2007, 27(2): 1-5
[12]	李鹏,汪阳东,陈益存,等. 油桐ISSR-PCR最佳反应体系的建立[J]. 林业科学研究,2008, 21(2): 194-199
[13]	李建安,孙颖,陈鸿鹏,等. 油桐LFAFY同源基因片段的克隆与分析[J]. 中南林业科技大学学报,2008, 28(4): 21-26
[14]	龙红旭,谭晓风,陈洪,等. 油桐油体蛋白基因的克隆及序列分析[J]. 中南林业科技大学学报,2010, 30(4): 31-38
[15]	Bradford M M. Rapid and sensitive method for quantitation of microgram quantities of protein utilizing principle of proteindye binding[J]. Analytical Biochemistry, 1976, 72(1-2): 248-254
[16]	Magni C, Scarafoni A, Herndl A, et al. Combined 2D electrophoretic approaches for the study of white lupin mature seed storage proteome [J]. Phytochemistry, 2007, 68(7): 997-1007
[17]	Wang X Q, Yang P F, Zhang X F, et al. Proteomic analysis of the cold stress response in the moss, Physcomitrella patens[J]. Proteomics, 2009, 9(19): 4529-4538
[18]	Han F, Chen H, Li X J, et al. A comparative proteomic analysis of rice seedlings under various high-temperature stress [J]. Biochimica et Biophysica Acta, 2009, 1794(11): 1625-1634
[19]	Liu H, Liu Y J, Yang M F, et al. A comparative analysis of embryo and endosperm proteome from seeds of Jatropha curcas[J]. Journal of Integrative Plant Biology, 2009, 51(9): 850-857
[20]	Blackstock W P, Weir M P. Proteomics: quantitative and physical mapping of cellular proteins [J]. Trends Biotechnol, 1999, 17(3): 121-127
[21]	Rabilloud T. Solubilization of proteins in 2-D electrophoresis: an outline [M]// Link A J. Methods molecular biology, Vol. 112: 2-D proteome analysis protocols.Totowa,NJ:Humana Press Inc.,1999: 9-19
[22]	Saravanan R S, Rose J K. A critical evaluation of sample extraction techniques for enhanced proteomic analysis of recalcitrant plant tissues [J]. Proteomics, 2004, 4(9): 22-32
[23]	Giavalisco P, Nordhoff E, Lehrach H, et al. Extraction of proteins from plant tissues for two-dimensional electrophoresis analysis [J]. Electrophoresis, 2003, 24(1-2): 207-216
[24]	Hurkman W J, Tanaka C K. Solubilization of plant membrane proteins for analysis by two-dimensional gel electrophoresis [J]. Plant Physiol, 1986, 81(3): 802-806
[25]	李德军,邓治,陈春柳,等. 植物组织双向电泳样品制备方法研究进展[J]. 中国农学通报, 2009, 25(24): 78-82
[26]	Liu H, Yang Z L, Yang M F, et al. The differential proteome of endosperm and embryo from mature seed of Jatropha curcas[J]. Plant Science, 2011, 181(6): 660-666
[27]	Wang W, Vignani R, Scali M, et al. A universal and rapid protocol for protein extraction from recalcitrant plant tissues for proteomic analysis [J]. Electrophoresis, 2006, 27(13): 2782-2786
[28]	Carpentier S C, Witters E, Laukens K, et al. Preparation of protein extracts from recalcitrant plant tissues: an evaluation of different methods for two dimensional gel electrophoresis analysis [J]. Proteomics, 2005, 5(10): 2497-2507
[29]	Shaw M M, Riederer B M. Sample preparation for two-dimensional gel electrophoresis [J]. Proteomics, 2003, 3(8): 1408-1417
[30]	李红兵,康振生. 小麦叶片蛋白质组分析中高丰度蛋白Rubisco酶的快速去除方法研究[J]. 西北农林科技大学学报:自然科学版, 2011, 39(6): 223-228
[31]	Yao Y, Yang Y W, Liu J Y. An efficient protein preparation for proteomic analysis of developing cotton fibers by 2-DE [J]. Electrophoresis, 2006, 27(22): 1-11
[32]	曹景林,朱龙付,谭家福,等. 适用于蛋白质双向电泳的棉花胚性培养物蛋白质提取技术[J]. 棉花学报,2009, 21(1): 3-9
[33]	王清,产祝龙,秦国政,等. 果实蛋白质组学研究的实验方法[J]. 植物学报, 2009, 44(1): 107-116
[34]	Meyer T S, Lamberts B L. Use of Coomassie Brilliant Blue R250 for the electrophoresis of microgram quantities of parotid saliva proteins on acrylamide-gel strips [J]. Biochim Biophys Acta, 1965, 107(14): 144-145
[35]	Candiano G, Bruschi M, Musante L, et al. Blue silver: a very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis [J]. Electrophoresis, 2004, 25(9): 1327-1333
[36]	Rabilloud T, Vuillard L, Gilly C, et al. Silver staining of proteins in polyacrylamide gels: a general overview [J]. Cell Mol Bio, 1990, 40(1): 57-75

[1]	索慧英 , 郑密 , 卢晗 , 曲冠证 , 李莹 . 杨树叶片蛋白质双向电泳图谱的建立. 林业科学研究, 2020, 33(2): 128-137. doi: 10.13275/j.cnki.lykxyj.2020.02.016
[2]	李佳 , 陆秀君 , 梅梅 , 孙晓梅 , 张晓林 . 银杏种胚蛋白提取及双向电泳体系的优化. 林业科学研究, 2016, 29(3): 383-388.
[3]	张启燕 , 高暝 , 吴立文 , 汪阳东 , 陈益存 . 不同发育时期油桐种仁油体蛋白质组分析. 林业科学研究, 2019, 32(1): 47-57. doi: 10.13275/j.cnki.lykxyj.2019.01.007
[4]	. 油桐种仁cDNA文库的构建及其油体蛋白oleosin基因的生物信息学分析. 林业科学研究, 2009, 22(2): -.
[5]	吴庆珂 , 杨素素 , 汪阳东 , 高暝 , 陈益存 . 油桐油质蛋白Oleosin编码基因5个VfOLE转录本的克隆与表达分析. 林业科学研究, 2014, 27(2): 233-239.
[6]	何兴波 , 雷莉莉 , 杨绍彬 , 傅建敏 , 李芳东 . 自交不亲和杏李品种‘风味玫瑰’授粉早期花柱蛋白质差异分析. 林业科学研究, 2014, 27(5): 590-597.
[7]	李鹏 , 汪阳东 , 陈益存 , 张小平 . 油桐ISSR-PCR最佳反应体系的建立. 林业科学研究, 2008, 21(2): 194-199.
[8]	陈炳章 , 杨乾洪 , 郭纯福 . 海拔高度对油桐生长结实影响的研究. 林业科学研究, 1990, 3(2): 195-199.
[9]	徐玲娜 , 汪阳东 , 陈益存 , 张姗姗 . 油桐DGAT2基因克隆及其RNAi双元表达载体构建. 林业科学研究, 2011, 24(5): 668-673.
[10]	花锁龙 . 油桐抗枯萎病株系的选鉴研究*. 林业科学研究, 1991, 4(2): 160-166.
[11]	陈炳章 . 不同物候期油桐各器官生物量消长规律的研究. 林业科学研究, 1991, 4(4): 428-434.
[12]	陈斐 . 油桐69个无性系的典范相关分析与选优研究. 林业科学研究, 1998, 11(5): 518-522.
[13]	苏梦云 , 周国璋 , 方嘉兴 , 刘学温 , 王劲风 . 油桐属与石栗属叶片核酸和蛋白质的比较研究. 林业科学研究, 1988, 1(2): 213-216.
[14]	苏梦云 , 周国璋 . 油桐属与石栗属叶绿体的核酸、蛋白质及超微结构的初步研究. 林业科学研究, 1988, 1(4): 424-427.
[15]	罗辑 , 周国英 , 朱积余 . 油桐尺蛾核型多角体病毒广西株全基因组序列. 林业科学研究, 2015, 28(5): 612-617.
[16]	陈川 , 张永安 , 王玉珠 , 曲良建 , 林思诚 , 柯沛强 . 油桐尺蠖核型多角体病毒(BusuNPV)生物学与检测技术研究. 林业科学研究, 2011, 24(3): 410-414.
[17]	刘力 , 龚宁 , 夏国华 , 吕健全 , 黄坚钦 . 山核桃种仁蛋白质及氨基酸成分含量的变异分析. 林业科学研究, 2006, 19(3): 376-378.
[18]	范国强 , 蒋建平 . 泡桐丛枝病发生与叶片蛋白质和氨基酸变化关系的研究. 林业科学研究, 1997, 10(6): 570-573.
[19]	王敬文 , 蒋晶 . 低温驯化的黑荆树悬浮培养细胞中可溶性蛋白质含量变化*. 林业科学研究, 1993, 6(6): 661-665.
[20]	林萍 , 姚小华 , 曹永庆 , 龙伟 , 王开良 , 滕建华 . 普通油茶泛素结合酶UBE2-J2的cDNA序列及蛋白质结构分析. 林业科学研究, 2013, 26(6): 744-751.

点击查看大图

计量

文章访问数: 3406
HTML全文浏览量: 150
PDF下载量: 1610
被引次数: 0

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

留言板

一种适合油桐种仁蛋白质分离的双向电泳技术体系

An Improved System of Two-dimensional Electrophoresis for the Tung Tree Seed Protein Separation

计量

一种适合油桐种仁蛋白质分离的双向电泳技术体系

English Abstract

An Improved System of Two-dimensional Electrophoresis for the Tung Tree Seed Protein Separation

全文HTML

目录

留言板

一种适合油桐种仁蛋白质分离的双向电泳技术体系

An Improved System of Two-dimensional Electrophoresis for the Tung Tree Seed Protein Separation

计量

出版历程

一种适合油桐种仁蛋白质分离的双向电泳技术体系

English Abstract

An Improved System of Two-dimensional Electrophoresis for the Tung Tree Seed Protein Separation

全文HTML

目录