构树ISSR反应体系的优化与建立

廖声熙; 崔凯; 张鹏; 王海英; 崔永忠; 袁首乾

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构树ISSR反应体系的优化与建立

廖声熙 , 崔凯 , 张鹏 , 王海英 , 崔永忠 , 袁首乾

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Citation:

构树ISSR反应体系的优化与建立

1.
中国林业科学研究院资源昆虫研究所, 云南昆明 650224
2.
西南林业大学资源学院, 云南昆明 650224
基金项目:
国家自然科学基金"西南干热河谷野生构树种质评价与分子鉴定研究(30972383)";中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(RIRICAF201007M)
中图分类号: S718.46

Establishment and Optimization of ISSR Reaction System of Broussonetia papyriferaz

1.
Research Institute of Resources Insects, Chinese Academy of Forestry, Kunming 650224, Yunnan, China
2.
Faculty of Natural Resources, Southwest Forestry University, Kunming 650224, Yunnan, China
CLC number: S718.46

摘要: 利用正交试验对Taq酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和模板DNA浓度5个因素进行优化,从而建立了一套适宜构树的ISSR-PCR反应体系。在20 μL的反应体系中,各反应物的最适宜含量为:0.07 U·μL-1Taq DNA聚合酶、0.35 μmol·L-1ISSR引物、0.3 mmol·L-1 dNTPs,2.0 mmol·L-1Mg2+、1.2 ng·μL-1模板DNA。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,46℃退火45 s,72℃延伸2 min,40个循环。
- 构树
- / ISSR
- / PCR反应体系
- / 正交试验优化
Abstract: The effects of five factors, such as the concentration of Taq DNA polymerase, primers, dNTPs, Mg2+ and DNA template, on ISSR-PCR reaction were optimized by orthogonal tests. Thus a suitable ISSR-PCR reaction system for Broussonetia papyrifera was established. The optimized ISSR-PCR system for B. papyrifera in 20 μL reaction mixture contained 0.07 U·μL-1 Taq DNA polymerase, 0.35 μmol·L-1 ISSR primers, 0.3 mmol·L-1 dNTPs, 2.0 mmol·L-1 Mg2+ and 1.2 ng·μL-1 DNA template. The suitable PCR protocol is preliminary denaturation at 94℃ for 5 min, 40 cycles of denaturation at 94℃ for 30 s, anneal at 46℃ for 45 s, extended at 72℃ for 2 min. This study could provide some references for the genetic diversity analysis of B. papyrifera.
- Broussonetia papyrifera
- / ISSR
- / PCR reaction system
- / optimization by orthogonal tests

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构树ISSR反应体系的优化与建立

1. 中国林业科学研究院资源昆虫研究所, 云南昆明 650224
2. 西南林业大学资源学院, 云南昆明 650224

收稿日期: 2012-08-10

基金项目: 国家自然科学基金"西南干热河谷野生构树种质评价与分子鉴定研究(30972383)";中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(RIRICAF201007M)

关键词:

摘要: 利用正交试验对Taq酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和模板DNA浓度5个因素进行优化,从而建立了一套适宜构树的ISSR-PCR反应体系。在20 μL的反应体系中,各反应物的最适宜含量为:0.07 U·μL-1Taq DNA聚合酶、0.35 μmol·L-1ISSR引物、0.3 mmol·L-1 dNTPs,2.0 mmol·L-1Mg2+、1.2 ng·μL-1模板DNA。PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,46℃退火45 s,72℃延伸2 min,40个循环。